Page 34 - 08-Lazareva

DOI: https://doi.org/10.15414/2020.9788055222745
Людмила Лазарева ‒ МЕДА УКРАИНЫ

G – измеренная величина электропроводности, мС.
Если измерения проводились при температуре, отличной от 20 °С, то
необходимо выполнить корректирующие расчеты, а именно: температура
измерения выше 20 °С – отнять 3,2% полученного значения на каждый градус,
выше 20 °С; температура измерения ниже 20 °С – добавить 3,2% полученного
значения на каждый градус, ниже 20 °С.
Определение активности инвертазы. Активность инвертазы определяли
методом, рекомендованым Европейской комиссией по меду (Harmonised methods
of the European Honey Commission) [2]. Метод точный, требует немного времени.
Сущность метода заключается в следующем.
В качестве субстрата (вещества, расщепляется под действием фермента)
используют p-нитрофенил-α-D-глюкопиранозид (pNPG), то есть
модифицированную сахарозу, в которой фруктоза замещена на нитрофениловий
остаток. pNPG расщепляется под действием инвертазы на глюкозу и нитрофенол.
Реакция останавливается путем доведения рН до 9,5, при этом нитрофенол
превращается в анион нитрофенолату.
Определение количества нитрофенолату проводят 400 нм на
фотоелектороколориметри (КФК-2).
Количество образованного нитрофенолату в микролит (мкл) точно
соответствует количеству в микролит использованного субстрата.
Таким образом, активность инвертазы меда может быть удержаны из
значения поглощения 400 нм и перечислена на 1 кг меда (Ед/кг) по эмпирической
формуле:
1 Ед/кг = 1 мкмл (pNPG)/мин х кг меда. (10).
Для определения активности инвертазы в меде готовят 20 % раствор меда.
Для этого 5 г меда растворяют в 25 мл 0,1 М фосфатного буфера, рН = 6,0. Наливают
в пробирки по 5 мл раствора субстрата и выдерживают в водяной бане при 40 °С 5
минут. В каждую пробирку добавляют по 0,5 мл 20 % раствора меда и инкубируют
еще 20 мин при 40 °С в водяной бане. Через 20 мин добавляют по 0,5 мл раствора
останавливают реакцию.
Одновременно для контроля инкубируют 5 мл раствора субстрата за 40 °С в
водяной бане ровно 5 мин и добавляют 0,5 мл раствора останавливают реакцию.
Через 20 мин инкубации в пробирку добавляют 0,5 мл 20 % раствора меда.
Контроль готовят за каждого испытания.
Образцы измеряют на КФК-2 при длине волны 440 нм против воды в кювете
толщиной 10 мм.
Расчет результатов.
Активность инвертазы рассчитывают по формуле:
1 Ед/кг = 6 х 0,05 х 0,05298 х 10 х ∆А400 = 158,94 х ∆А400 , (11)
4
где: ЕД – международная единица, принятая для 1 мкл/мин.;
6 – объем исследуемого образца в мл (общий объем)
0,05 – пересчет времени реакции с 20 мин. на 1 мин;
104 – пересчет количества меда в образце (0,1г в 0,5 мл) в 1 кг.
Фактор пересчета мкг в мкл: 0,05298 = 7,37/ 39,11, где 7,37 – это значение
соответствующего фактора для p-нитрофенола и 139,11 молекулярная масса p-
нитрофенола.
Определение содержания цезия 137Cs в образцах меда. Содержание 137Cs
в образцах меда определяют гамма-спектрометрическим методом на гамма-
спектрометрического установке с полупроводниковым детектором типа GEM-

33