Page 57 - Chernik

DOI: https://doi.org/10.15414/2020.9788055222776

Черник М., Войналович Н., Сиренко Е., Пилипко Е. ‒ Патологии пчёл

индивидуумами популяции. Поэтому были подобраны праймеры к
консервативному локусу межгенных спейсеров ITS1 и ITS2 5,8 S, который
находится между генами 18 S и 28 S рибосомальной ДНК.

Табл. 3.5. Основные параметры сконструированных праймеров.
Температура
Праймер Последовательность, 5'-3' плавления (Tm), GC, Ампликон,
п. н.
%
°С
F asc
(ITS1) GGCTAGGTGCCCCTAAACAAG 66 57 471
R asc
(ITS2) CTAGAGCGAAAGACAAAGCCC 64 52

Подобранные праймеры (табл. 3.5), кодирующие межгенные спейсеры,
фланкируют участок 1648–2118 штамма CQ867786 длиной 471 п. н. (рис. 3.7).

Рис. 3.7. ITS1-5,8 S-ITS2 фрагмент штамма CQ867786 длиной 471 п. н.
(Тяпша, 2017)

По результатам множественного выравнивания 15 нуклеотидных
последовательностей с помощью программы Align X данного участка генома
A. apis было определено общие видоспецифические участки подобранных
праймеров. Специфичность подобранных праймеров проверялась программой
BLAST, так чтобы 100 % идентичность праймера во всех его 21 нуклеотидах
соответствовала только A. apis (90 % совпадение было у обратного праймера
только при сравнении с секвенсом штамма KJ123947.1, но это можно объяснить
ошибкой секвенса в двух нуклеотидах на 5 штрих конце обратного праймера 5′-
NNAGAGCGAAAGACAAAGCCC-3′).
При постановке ПЦР с пробами ДНК, выделенной из личинок пчёл,
поражённых грибом A. apis, диагноз подтвердился (рис. 3.8).
Таким образом разработанная в Республике Беларусь тест-система для
диагностики возбудителя аскосфероза пчёл позволяет проводить быструю (в
течении 5 ч) детекцию генома A. apis как в организмах, так и в объектах
окружающей среды и может быть использована для более эффективного
диагностирования скрытых форм аскосфероза на пчелопасеках, а также при
пересылке маток, пакетов пчёл и другой продукции пчеловодства.
В результате проведенных исследований установлено, что основным
микозным заболеванием пчёл в Республике Беларусь является аскосфероз.
Выделенные штаммы возбудителя аскосфероза пчёл относятся к виду
A. аpis var. аpis.

56