Page 61 - Chernik

DOI: https://doi.org/10.15414/2020.9788055222776

Черник М., Войналович Н., Сиренко Е., Пилипко Е. ‒ Патологии пчёл

которые обладают регуляторными, антиоксидантными и защитными свойствами.
(Мосолов, 2001; Мосолов, 2005). Растительные ингибиторы протеиназ
обнаружены в тканях животных, растений и микроорганизмов. Способность
белковых ингибиторов подавлять активность протеиназ млекопитающих,
насекомых и микроорганизмов легли в основу представлений об их защитных
функциях. В настоящее время большое внимание уделяется поиску ингибиторов
среди дикорастущих видов растений, поскольку они являются поистине
неоценимым и богатейшим источником разнообразных форм этих белков.

Табл. 3.7. Фунгицидная активность препаратов йода в отношении A. аpis
№ Наименование препарата Зона задержки роста, мм
1 Диоксидин 1 % 0
2 Диоксидин 5 % 0
3 Диоксидин 50 % 0
4 Окситетрациклина гидрохлорид 0
5 Норсульфазол 0
6 Раствор Люголя 2,0
7 Йодинол 5,0
8 1 % метиленовый синий 10,0
9 10 % настойка йода 15,0,
10 5 % настойка йода 12,0

Объектом исследований служили 20 видов культурных и дикорастущих
растений флоры Беларуси. Было установлено, что наиболее высокая активность
ингибиторов протеиназ (в частности, трипсина) характерна для корней крапивы
двудомной. Сухие корневища и корни крапивы размалывали в муку, которую
экстрагировали 0,2 М NaCl в соотношении 1:20 соответственно, в течение 10–12 ч
при температуре 4–5ºС, смесь центрифугировали 15 мин при 6000 об/мин и
температуре 4–5ºС. Экстракт подкисляли 0,5 н HCl до рН 4,0 в течение 2–3 ч до
образования осадка, который снова центрифугировали при 6000 об/мин в течение
15 мин. Из полученной надосадочной жидкости высаливали белки сульфатом
аммония до 80 % насыщения в течение 24 ч, после центрифугирования осадок
суспендировали в 30 мл дистиллированной воды и наносили на колонку с
акрилексом Р-30 (гелем на основе полиакриламида), уравновешенной
дистиллированной водой. Элюцию осуществляли дистиллированной водой при
скорости 20 мл/ч. Общий профиль хроматографии представлен на рисунке 3.9.
Ингибиторные фракции белка выходили в объёме элюата 80–180 мл. Их
собирали и лиофильно высушивали. Как показали исследования, ингибитор
принадлежит к классу сериновых протеиназ, обладает высокой термо- и рН-
устойчивостью, а также содержит ингибитор трипсина с молекулярной массой 8–
22 кДа, белок-ингибитор химотрипсина с молекулярной массой 23–25 кДа, белок с
молекулярной массой 50–70 кДа и дистиллированную воду (соотношение
компонентов следующее: белок-ингибитор трипсина – 40 мас. %, белок-ингибитор
химотрипсина – 20 мас. %, белок –10 мас. %, остальное (30 мас. %) – вода.
Результаты исследований обнаружили способность белковых ингибиторов
на 50–80 % угнетать прорастание спор и активность экзогенных пептидаз
энтомопатогена A. apis, вызывающего аскосфероз пчёл (табл. 3.8, рис. 3.10).
Угнетение площади роста энтомопатогена на 6 сутки составляло 88–100 %.
(табл. 3.9).

60