Page 59 - Chernik

DOI: https://doi.org/10.15414/2020.9788055222776

Черник М., Войналович Н., Сиренко Е., Пилипко Е. ‒ Патологии пчёл

воздействия на продукты пчеловодства и жизнедеятельность пчелиных семей, а
также имеют целый ряд преимуществ, поскольку содержат комплекс биологически
активных веществ, которые при введении в организм, даже в очень малых
количествах, благоприятно влияют на организм, обладают меньшим побочным
действием по сравнению с химическими аналогами, лучше переносятся
организмом (Моссолов, 2001).
Оценка влияния растительных препаратов проводилась на культурах гриба
A. apis в лабораторных условиях. Чистые культуры грибов A. apis, полученные из
плотных питательных сред после первичного посева образца клинического
материала и прошедшие идентификацию культуры, подлежали исследованию по
оценке фунгицидочувствительности. Возраст культуры для опыта был
одинаковым для каждого исследования и составлял 5–8 суток. Для того, чтобы
каждая серия опыта проводилась со спорами одного возраста, производили
периодический пересев культуры.
Споровую суспензию готовили не ранее чем за 30 мин до начала опыта. Для
этого в чашку Петри или пробирку с культурой гриба наливали стерильную
дистиллированную воду, затем брали препаровальную иглу, на кончик которой
накалывали стерильный кусочек обычного ластика, и несколько раз легко
проводили ним по поверхности агаризированной среды с культурой. Полученную
споровую суспензию фильтровали через стерильную марлю. В суспензию в
некоторых случаях вводили 0,05 % сахарозы, для повышения жизнеспособности и
лучшего прорастания спор.
В опытах использовали концентрацию 200 тыс. спор в 1 мл. С помощью
камеры Горяева определяли исходную концентрацию споровой суспензии, а затем
разбавляли ее водой до нужного индекса и снова контролировали с помощью
указанной камеры.
При оценке чувствительности спор гриба к фунгициду
(фунгицидочувствительность) применяли экстракты и настойки растительного
сырья или водную суспензию препаратов. Расчет проводили на 100 мл стерильной
дистиллированной воды. Для получения меньших концентраций разбавляли
раствор дистиллированной водой.
Для опыта на фунгицидочувствительность применяли среду Сабуро. Её
разливали в чашки Петри по 20 мл. Инфицирование поверхности питательной
среды проводили через 2–3 ч после разливки среды. Для заражения поверхности
использовали споровую суспензию гриба. Опыт включал: контроль – посев на
среду без фунгицида и положительный контроль – имеющий высокую
фунгицидную активность против данного рода грибов.
В ходе исследования было использовано метод диффузии, который
заключается в следующем: в застывшей питательной среде (среда Сабуро)
вырезали лунки стерильным штампом диаметром 12 мм. В образовавшуюся лунку
заливали испытуемые препараты. Чашки помещали в термостат на 3–4 ч для
диффузии препаратов в среду. Затем на поверхность приготовленных
питательных сред вносили полученную споровую суспензию. Посев культуры
проводили путем распределения суспензии по агару стерильным шпателем.
Результаты роста культуры и фунгицидное действие препаратов оценивали через
3, 5 и 8 суток после выдерживания в термостате при температуре 28°С. В случае
положительного эффекта чувствительные штаммы прекращали рост на
некотором расстоянии от лунок или вовсе не росли на её поверхности.
Также для определения фунгицидности препаратов параллельно с методом

58