Page 15 - Chernik

DOI: https://doi.org/10.15414/2020.9788055222776

Черник М., Войналович Н., Сиренко Е., Пилипко Е. ‒ Патологии пчёл

Перед вскрытием, зафиксированную в спирте пчелу помещали в чашку
Петри, которую наполняли водой так, чтобы полностью покрыть тело насекомого.
Для работы с объектом было использовано два анатомических глазных пинцета с
заостренными концами, маленькие острые ножницы и препаровальные иглы,
функцию последних выполняли одноразовые инсулиновые шприцы объёмом
2 мл. Чашку Петри с погруженным в воду материалом изучали под бинокуляром
МБС-10 с галогеновой лампой (8В/20В). Вскрытие осуществляли при увеличении
в 8, 16 и 32 раза, кратность увеличения зависела от размеров исследуемой
структуры.
Для изучения анатомии пчелы, брюшко (метасому) аккуратно отсоединяли
от грудных сегментов (мезосомы), после производили два коротких латеральных
надреза с обеих сторон брюшка с помощью пинцетов и ножниц. Затем поочередно
удаляли стерниты и тергиты, причем все манипуляции проводили крайне
осторожно, чтобы не повредить внутренние органы пчелы. Ножницами
постепенно подрезали трахеи, окружающие все внутренние структуры,
отсоединяли один за другим склериты и переносили их в другую чашку Петри для
дальнейшего исследования (Лаврехин, 1983). Внутренние органы, после удаления
экзоскелета, с помощью препаровальных игл располагали таким образом, чтобы
можно было исследовать отдельные элементы желудочно-кишечного тракта,
комплекса жала с железами и Мальпигиевых сосудов (рис. 1.3). Все структуры
каждой отдельной пчелиной особи были зафиксированы на камеру смартфона
Meizu U10 (13 Мп) и iPhone Xr (12 Mп), а учет фотографий вёлся в дневнике
полевых наблюдений.
Кодирование состояний (0/1/2) исследуемых патанатомических признаков
осуществляли по стандартизированной схеме, описанной в литературе
(vanEngelsdorp, 2017). Где состояние (0) означало отсутствие признака, состояние
(1) присваивалось в случае наличия признака. Для некоторых признаков (цвет
структуры или её размер) проводилась более сложная градация состояний:
состояние (0) – для самого низкого уровня проявления признака, состояние
(1) – для средней степени его проявления, состояние (2) – когда характеристика
признака превышала средние значения. Более подробное описание состояний всех
признаков будет показано далее в тексте и проиллюстрировано на авторских
фотографиях, сопровождающих данный раздел. Для сравнения полученных
результатов с описанными в литературе, использовали процентные доли особей,
у которых наблюдали определенное состояние конкретного признака.
Исследование предполагаемых диагностических маркеров CCD обычно
проводили в несколько этапов. В первую очередь, после вскрытия, брюшко
проверялось на наличие меланизированных тканей (признак 1, рис. 1.4). Подобное
потемнение тканей различной локализации является результатом активности
защитного фермента – фенол-оксидазы, и может свидетельствовать об активации
клеточного иммунного ответа. Кроме того, меланизированные ткани редко
встречаются у молодых пчёл и могут говорить о возрастных изменениях анатомии
и физиологии медоносной пчелы (Chmiel, 2020; vanEngelsdorp, 2017). Лишь у 6,7 %
обследованных особей было обнаружено меланизацию соединительной ткани
брюшка (состояние (1) признака 1).
Далее брюшко обследовали на наличие белых узелков, которые могут
прикрепляться к различным органам медоносной пчелы или же просто
располагаться в полости тела насекомого (признак 2, рис. 1.5). Известно, что такие
узелки состоят из клеток гемолимфы – гемоцитов, обогащенных аминокислотой

14